合肥巅峰生物专业研发生产蛋白酶K
合肥巅峰生物科技有限公司是一家集生物科技产品的科研、销售于一体的民营科技企业。公司注册于合肥经济技术开发区,与国内知名大学等高校深度合作。巅峰生物有着一支极富热情、经验丰富的管理、研发和销售队伍。研发小组的技术人员有教授2名、博士生1名,研究生6名,本科生6名。
目前公司的主要产品是蛋白酶K、ATP荧光检测仪、生物试剂、食品安全检测仪器以及耗材等。本公司的ATP荧光检测仪,已完全投放市场,并得到了客户的一致好评。巅峰生物公司生产的蛋白酶K(专利号:201410472748.1)在尿素和SDS中具有降解天然蛋白质的能力,因而被广泛应用于制备脉冲电泳的染色体DNA、蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。保存方式不仅可以在冻干粉状态下保持酶活一年,而且在溶液状态下亦可保持酶活一年以上。
公司秉承:诚信、品质、服务的经营理念,对客户诚信负责,对工作精益求精、对伙伴协作共享。坚持:高效、务实、学习、创新的企业精神;倡导:忠诚、勤奋、合作、能力的人才理念。
(一)、产品简介:
蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从布氏白僵菌(Beauveria bassiana)中纯化得到,用于生物样品中蛋白质的一般降解。该酶有两个ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性,在尿素和SDS中也较为稳定,还具有降解天然蛋白质的能力。
规格:100毫克普通装或客户定制
比活性值:38 U/mg蛋白
来源种属:酵母菌
分子质量:28,650
(二)、产品检测报告
1、稀释缓冲液
根据需要,利用20mM Tris-HCL 缓冲液(PH 7.5)溶解成20mg/ml的工作浓度。
2、质量说明
活性单位定义 |
37℃、PH7.5条件下,每分钟可水解底物酪蛋白生成1μmol酪氨酸所需蛋白酶K的量,定义为一个单位。 |
脱氧核糖核酸酶残留 |
以λDNA为底物,37℃消化4小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。 |
核糖核酸酶残留 |
37℃消化12小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。 |
3、酶纯度测定(SDS—PAGE)
结果:蛋白酶K纯度超过99.2%。
4、酶活性测定
蛋白酶K比活性值 |
||
产品来源 |
本产品 |
西格玛 |
比活性值(U/mg) |
38 |
>30 |
5、酶稳定性测定(—20℃冷冻条件下,12个月的数据)
结果:干粉状态正确储存,一年内酶活性保持不变;溶解状态酶活性一年内降低小于2%。
6、酶质检结果
序号 |
检验项目 |
检验标准 |
是否合格(合格√) |
1 |
动物基因组提取(蛋白酶K浓度为20mg/ml) |
不影响动物基因组的有效提取 |
√ |
与不加蛋白酶K的样品相比,能有效降解蛋白质 |
√ |
||
2 |
降解蛋白质能力 |
与15ug BSA 37℃孵育1小时,BSA可有效降解 |
√ |
质检结论:合格(√) 让步放行( ) 需要复检( ) 不合格( ) |
(三)、抑制剂
蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶,因此可以用苯甲基磺酰氟抑制其作用,苯甲基磺酰氟是一种丝氨酸蛋白酶的抑制剂。在纯化蛋白质时用于防止蛋白质的降解。
(四)、应用范围
蛋白酶K的用途广泛,主要的应用行业包括:医疗及基础研究领域:基因诊断试剂盒;基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶;此外,还应用于:皮革工业(皮革软化及精细化、脱毛和软化、蚕丝脱胶)制备脉冲电泳的染色体DNA;提取组织中非蛋白成分时,降解含有蛋白质杂质;食品、酿造工业:肉类嫩化、酒类澄清;洗涤工业:酶洗衣粉、洗衣液等也有应用。
(五)、贮存和使用
干粉条件下有效期为24个月,液态时—20℃保存12个月。客户利用缓冲液溶解后,需要—20℃贮存。溶解后,最好分装成若干份,方便使用,避免反复冻溶。如果需要在2-8℃环境下放置,超过三天,建议过滤除菌或加入抑菌剂如3%叠氮化钠,防止微生物污染。
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
巅峰生物生产的蛋白酶K,是一种来源于新发现的真菌蛋白酶K基因,经优化后异源重组表达得到的切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于该蛋白酶K在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白质的能力,因而被广泛应用于制备脉冲电泳的染色体DNA、蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。
严格的对比实验研究表明,本公司产品蛋白酶K与现有市场上林伯氏白色念球菌来源的蛋白酶K产品相比,对大片段蛋白质的切割能力基本相同,而在小片段蛋白质的降解能力方面较其他产品活力高出50%以上。
通过工艺优化及单因素实验分析,优化调整培养基配方;采用先进的节能设备,降低能耗、降低生产成本。
与中国科技大学紧密合作,研发构建可表达高活性蛋白酶K 的布氏白疆菌,并申请发明专利进入实审期。
由于蛋白酶K优良的蛋白水解能力和特性,除了在生物科学研究方面,其在食品加工、饲料生产、环境保护、医药工业、能源和资源开发等各个领域都有快速增加的需求。蛋白酶K 的广泛应用范围让我们看到了未来市场对蛋白酶K 的迫切需求,因此,在生物医药等市场迫切需求和发展趋势的前提下,结合自身资源配置能力,巅峰未来的发展,一是继续研究蛋白酶K的分子结构与功能的相互关系,采用多种高通量技术进化分子结构,进一步提高酶催化特性;另一方面,提高蛋白酶K的重组表达技术,大幅度提高生产水平和降低生产成本,满足该重要酶在食品和饲料加工过程中的不断增加的迫切需求。
中国市场表现与西方市场有较大差异,除淀粉糖化酶、碱性蛋白酶外,其他酶种目前消费很少,但随着酶工程技术的研究开发,燃料乙醇、生物柴油等生物能源、生物环保、生物制造等领域,酶制剂有着广泛的应用。国民经济中占据重要地位但原料和能源消耗大、环境污染严重的造纸、纺织、制药、饲料等行业,酶制剂的应用也在扩大,未来市场前景一片大好。
酶制剂产品定位——让巅峰酶制剂成为生物技术和生物制药行业的高端产品,未来在成功开发蛋白酶K的基础上,充分发挥校企联合的优势,开发系列酶产品。在未来3-5年,占据市场份额50%以上。
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