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巅峰生物蛋白酶K应用范围

发表时间:2016-2-26 浏览次数:3644  【关闭

蛋白酶K应用范围:

  蛋白酶K已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。皮革工业的脱毛和软化已大量利用蛋白酶,既节省时间,又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用,如用胃蛋白酶治疗消化不良,用酸性蛋白酶治疗支气管炎,用弹性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品,含碱性蛋白酶,能去除衣物上的血渍和蛋白污物,但使用时注意不要接触皮肤,以免损伤皮肤表面的蛋白质,引起皮疹、湿疹等过敏现象。具体应用如下:

一、在肉类嫩化中的应用

  蛋白酶K能分解肉的肌纤维,结缔组织的蛋白质,甚至包括弹性蛋白及胶原蛋白,使蛋白质的各级空间结构发生变化,部分肽键断裂,肉料吸水膨胀,质地变嫩。

二、在DNA、RNA提取过程中的应用

  蛋白酶K在核酸的分离与纯化过程中有着重要的应用,能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。蛋白酶K还常被用于RNA提取过程中RNase的抑制和降解。

三、在原位杂交中的应用

  蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前标本的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以利于检测探针的穿透,提高检测的敏感性。

四、在灭活生活和工业用水中细菌的应用

  病毒外层结构一般以衣壳蛋白为主,衣壳蛋白保护病毒使其免受环境因素的影响并且决定病毒感染的特异性,蛋白酶K可以对病毒衣壳蛋白进行破坏(识别位点是大肠杆菌B脂多糖外膜中的二糖基残基),从而干扰病毒与宿主细胞的结合。

五、在生物检测中的应用

  蛋白酶k由于能够不特定的水解天然和变性蛋白,所以研究蛋白酶k对某一特定蛋白的作用对于研究这个蛋白起着非常关键的作用。

  性犯罪案件侦查工作经常需要在夹杂大量其他细胞物质的条件下查找精子进行鉴定。

蛋白酶K的检测报告:

1)不含RNase和DNase;

2)来源于基因重组酵母菌株;

3)在尿素和SDS中稳定存在;

4)稀释液:纯水;

5)在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性,最佳pH范围为pH 7.5-8.0;

6)反应条件:反应缓冲液中37℃-56℃温育1h;推荐反应温度选择50- 55℃;

7)活力单位定义:在37℃,pH7.5的条件下,每分钟释放1µM酪氨酸所需要的蛋白酶K量定义为1个活性单位;

8)失活方法:反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活,65℃温育10-15min可部分失活;

9)电泳纯度:≥99%;

10)酶活性值(Enzyme activity):≥30U/mg冻干粉。

蛋白酶K的保存方法:

保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。

孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

 

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